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▲NGS高通量測序基本流程
Basicprocess for high-throughput sequencing NGS
對長鏈DNA(通常指生物染色體DNA)片段化的主要原因是短鏈DNA片段有利于進行DNA分子快速雜交和高靈敏目標(biāo)檢測,可顯著提升測序效率。目前,常用的染色體脫氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid, DNA)分子片段化方法主要有四種,分別為:DNA限制性酶切法、水動力剪切法、超聲波斷裂法、噴射霧化法,四種方法各有利弊。
▲DNA分子結(jié)構(gòu)形態(tài)
Molecularstructure and morphology of DNA
超聲打斷基于水動力剪切法和超聲波斷裂法,是最常見的DNA片段化方式。其原理為:液體在高頻率的脈沖作用下,產(chǎn)生無數(shù)的高壓點和低壓點,伴隨產(chǎn)生的空化泡存在幾毫秒又因壓力變化而爆破,在這個過程中液體內(nèi)形成瞬時高強度剪切力,這種作用力可以破碎細胞、影響蛋白質(zhì)和剪切DNA。在此特別推薦新芝生物的一款特色產(chǎn)品:SCIENTZ18-A超聲波DNA打斷儀,采用非接觸式的工作方式,單次最高處理量可達12個樣品,是染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)和DNA剪切研究平臺的標(biāo)準(zhǔn)化工具。
超聲波DNA打斷儀是將DNA暴露于均勻的超聲體系中進行無偏剪切,從而產(chǎn)生的大量均勻大小的雙鏈DNA,具有以下優(yōu)勢:
樣品零污染:非接觸式封閉破碎,降低污染風(fēng)險
處理效率高:單次可處理12個樣品,處理速度快
無差別打斷:DNA片段集中無偏好
等溫處理:配備冷水機,恒溫打斷防止ChIP實驗中蛋白質(zhì)變性
使用高速分散器(例如XHF-DY)或研磨器(例如SCIENTZ-12或DY89-II)將生物樣品于冰浴條件(例如XB-70)下進行處理以獲得均質(zhì)溶液;
對獲得的均質(zhì)溶液,一般使用超聲細胞破碎機(例如為SCIENTZ-IID)或高壓細胞破碎機(例如JG-IA)進行處理,特殊樣品可配置冰浴環(huán)境,以獲得含有細胞內(nèi)容物的溶液;
對細胞破碎后的溶液進行冷凍離心(例如HSC-2015L),取上清液備用;
4.1將破碎后溶液放置于0.2 mL或0.5 mL EP管,于適配器中旋緊螺母進行固定;
4.2將適配器置于水浴環(huán)境中,開啟配套冷水機,設(shè)置溫度為6℃;
4.3待溫度降至設(shè)定溫度時,設(shè)定DNA打斷參數(shù)(如超聲開20 s,超聲關(guān)25 s,功率300 W,超聲總時間30 min),啟動打斷程序;
4.4完成打斷后,取下DNA樣品低溫保存防止降解,用于進一步研究。
▲大腸桿菌DNA打斷效果
▲DNA濃度為50ng/uL的打斷效果
SCIENTZ18-A超聲波DNA打斷儀采用恒溫、非接觸的方式對樣品進行打斷、勻漿和混合,具有無菌操作、無損作業(yè)、微量打斷的特點,同時處理多個樣品可完美適配二代測序,適用于多類生物樣品,是ChIP和DNA剪切研究平臺的重要工具。
新芝生物專業(yè)研發(fā)生產(chǎn)超聲波細胞粉碎機、超聲波清洗機和超聲波細胞破碎儀等各種科研實驗儀器與工業(yè)化生產(chǎn)設(shè)備
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